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載體構建是分子生物學研究常用的手段之一。主要包括已有載體多克隆位點MCS的改造和已有載體啟動子、增強子、篩選標記等功能元件的改造。載體構建完成后可利用PCR原理進行測序驗證。
載體構建(vectorconstruction)是把連接好的DNA分子運送到受體細胞中去。必須尋找一種能進入細胞、在裝載了外來的DNA片段后仍能照樣復制的運載體。理想的運載體是質粒(plasmid)，在基因工程中，常用人工構建的質粒作為載體。當給質粒插入一段外源DNA片段后，它依然能夠進行自我復制。